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堿性磷酸酶染色液

點(diǎn)擊次數(shù)：4602　日期：2019/6/12 14:38:34

堿性磷酸酶染色液
產(chǎn)品簡介：
     堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi)，其活性所需最適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及微動脈和毛細(xì)血管動脈部之內(nèi)皮，還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。
     堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時偶聯(lián)法)，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使 AS-BI 磷酸鹽水解，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中，該染液可用于血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色，位于胞槳，結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。
產(chǎn)品組成：
產(chǎn)品
3*10ml
 3*20ml
Storage
試劑(A):ALP固定液
100ml
20ml
RT 避光
試劑(B): ALP 孵育液
B1:AS-BI染色液
3*2ml
5*2ml
-20℃避光
B2:FBB染色液
5ml
10ml
4℃避光
臨用前，按 B1:B2=1:1 比例混合，即為 ALP 孵育液，即配即用。
試劑(C):核固紅染色液
10ml
20ml
4℃避光
使用說明書
         1份
自備材料：
1、載玻片、濕盒
2、顯微鏡
3、4%多聚甲醛固定液(備選)
操作步驟(僅供參考)：
1、血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定)，水洗。
2、滴加配制好的 ALP 孵育液，放入濕盒中避光孵育15～20min，水洗。
3、入核固紅染色液復(fù)染 3～5min。
4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。
(二) 貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
1、取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細(xì)胞，棄液，PBS清洗干凈。
2、加4%多聚甲醛固定10～20min，PBS 清洗。
3、滴加配制好的ALP孵育液，放入濕盒中避光孵育15～20min，PBS清洗。
4、入核固紅染色液復(fù)染0.5～3min。
5、PBS 清洗、鏡檢。
染色結(jié)果：
ALP 活性部位
藍(lán)色
細(xì)胞核
紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)
 
血液、骨髓涂片結(jié)果判斷：
一般以積分報告結(jié)果，根據(jù)100個中性粒細(xì)胞陽性顆粒進(jìn)行 0～4+計分。
細(xì)胞分值
染色特點(diǎn)
0
無顆粒
1
稍有顆粒
2
中等程度顆粒
3
多數(shù)顆粒
4
充滿顆粒
臨床意義：
1、類白血病反應(yīng)積分明顯增高，未經(jīng)治療的慢性粒細(xì)胞白血病積分明顯減低。
2、急性細(xì)菌性感染積分明顯增高，病毒性感染積分多正�；驕p低。
3、再生障礙性貧血積分常增高，PNH、MDS 積分常減低。
注意事項：
1、AS-BI 染色液易失效，應(yīng)避免反復(fù)凍融，臨用前低溫緩慢溶解，不可用溫水或熱水助溶。
2、ALP 孵育液易失效或降低陽性強(qiáng)度，即配即用，不宜久置。
3、血液或骨髓細(xì)胞涂片或其他樣本均應(yīng)新鮮，薄厚適宜，及時固定，否則會影響酶的活性。
4、培養(yǎng)細(xì)胞染色操作過程中，清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微，以免損傷或丟失細(xì)胞。
5、培養(yǎng)細(xì)胞或細(xì)胞爬片染色建議采用 4%多聚甲醛固定液，ALP 固定液更適用于血液或骨
髓細(xì)胞圖片的固定，染色時間應(yīng)根據(jù)具體細(xì)胞特性而異。
有效期：12個月有效。

原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司

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