普通瓊脂培養(yǎng)基配制

1、根據(jù)用量按比例一次稱取各種成分，牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂20-30g、蒸餾水1000ml。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水融化后倒入燒杯。蛋白胨易吸濕，稱量時(shí)要迅速。

2、在燒杯中加入少于所需的水量，加熱，逐一加入各成分，使其溶解，瓊脂在溶解煮沸后加入，融化過(guò)程需不斷攪拌。加熱時(shí)應(yīng)注意火力，勿使培養(yǎng)基燒焦或溢出，榮好后，補(bǔ)充所需水分。

3、校正PH值的方法為：取3只與標(biāo)準(zhǔn)比色管(ph7.6)相同的空比色管，其中一管內(nèi)放蒸餾水5ml，另外兩管各加入待測(cè)的肉湯培養(yǎng)基5ml，其中一管內(nèi)加入02%酚紅指示劑0.25ml（滴定管），搖勻，按下圖所示排列，舉起比色架，對(duì)光觀察。若滴定管色條較淡或?yàn)辄S色，即表示培養(yǎng)基偏酸性，需滴加0.1mol/L NaOH校正；若呈紅色，即表示偏堿性，應(yīng)滴加0.1mol/L HCL校正；使之與標(biāo)準(zhǔn)色管色澤相同為止。通常未校正前的肉湯均呈酸性。記下用去的NaOH(或HCl)溶液量，由此計(jì)算出校正全量培養(yǎng)基時(shí)所需NaOH(或HCl)溶液量。

4、趁熱用濾紙或多層紗布過(guò)濾，以利于某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察，如無(wú)特殊要求時(shí)可省去此步驟。

5、按照實(shí)驗(yàn)要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角瓶?jī)?nèi)。分裝時(shí)注意勿使培養(yǎng)基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。

①液體分裝 分裝高度以試管高度的1/4左右為宜，分裝三角瓶的量則根據(jù)需要而定，一般以不超過(guò)三角瓶溶劑的1/2為宜。

②固體分裝 分裝試管時(shí)其裝入量不超過(guò)試管高度的1/5，滅菌后制成斜面，斜面長(zhǎng)度不超過(guò)管長(zhǎng)的1/2.分裝三角瓶，不超過(guò)容量的1/2為宜。分裝培養(yǎng)皿，已覆蓋培養(yǎng)皿底部厚度2-3mm為宜。

③半固體分裝。裝入量以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。

6 分裝完畢后，在使館口或三角瓶口塞上棉花，以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基而造成污染，病保證有良好的通氣性能。

7、包扎、滅菌 棉塞上包一層牛皮紙，扎緊，即可進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。

8、將滅菌的試管培養(yǎng)基管口端擱在玻璃棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長(zhǎng)度一下不超過(guò)試管總長(zhǎng)度1/2為宜。

9、滅菌后的培養(yǎng)基放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h，以檢驗(yàn)滅菌效果，無(wú)污染方可使用。

將滅菌的普通瓊脂培養(yǎng)基加熱融化，待冷至50℃左右，加入無(wú)菌的托纖維綿羊血或家兔鮮血5%混合后，分裝滅菌試管后立即白城斜面或傾注于滅菌平皿（如果瓊脂溫度過(guò)高，鮮血加入后則成紫褐色；溫度過(guò)低，則鮮血加入后瓊脂易凝不易混合。注意，混合時(shí)切勿產(chǎn)生氣泡）。帶凝固后，置37℃培養(yǎng)24h，無(wú)菌檢驗(yàn)合格后方可應(yīng)用。

無(wú)菌血液時(shí)用無(wú)菌操作方法采集健康動(dòng)物，通常是綿羊或家兔的血液，加到盛有5%滅菌枸緣酸鈉或3%滅菌肝素鈉的100ml三角瓶?jī)?nèi)，或加到盛有玻璃小珠的滅菌三角瓶?jī)?nèi)搖勻脫纖后置冰箱中代用。

肉渣湯（皰肉）培養(yǎng)基

于每只試管中加入2-3g牛肉渣及肉高湯5-6mL，液面蓋以一薄層石蠟油，經(jīng)121.3℃20-30min滅菌后保存于冰箱中備用。詞培養(yǎng)基用于厭氧菌的培養(yǎng)，必須注意，在使用時(shí)，將肉渣培養(yǎng)基置于水浴鍋煮沸10min以驅(qū)除管內(nèi)存留的氧氣。
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