多步分散程序的方法為：首先制備幾種工作溶液。
檸檬酸緩沖液：將85.50g蔗糖（250mM）、檸檬酸三鈉。2H2O，11.76g（40mM）溶于約800ml蒸餾水，再加入50ml二甲基亞砜（DMSO），加入蒸餾水至總體1000ml，pH7.6。
貯液：貯液用于制備A液、B液、C液和流式細(xì)胞計(jì)的鞘液中。將2000mg（3.4mM）檸檬酸三鈉·2H2O，2000ul（0.1%V/V）NonidetP40（NP40），1044mg（1.5mM）四氯酸精胺，121mg（0.5mM）羥甲基甲胺（Tris）加入蒸餾水中，使總體積為2000ml，pH7.6.
A液：將15mg胰酸溶于500ml貯液中，pH7.6.
B液：將250mg胰酶仰制劑和50mg RNA酶A溶于500ml 貯液中，pH7.6.
C液：將208mg PI和580mg四氯酸精胺加至500ml貯液中，pH7.6，注意C液在制備、貯存和染色過程中都應(yīng)避光。
染色溶液的長期貯存方法：分裝成5ml的染液在塑料管中存貯于—80℃中。使用前，將貯存的染液立即入37℃的水浴中。然后將A液和B液在室溫下保存，直到使用，C液保持在水浴中。
細(xì)胞的長期貯存方法：不立即進(jìn)行染色和分析的樣品，可以長期冰凍保存。具體方法是：將檸檬酸緩沖液每400ul分裝在聚丙烯管中，每管可懸浮大約106細(xì)胞，將管立即浸入干冰和99%乙醇（—80℃）的混合液中，然后存貯于—80℃冰箱中。分析前，將樣品迅速地置于37℃水浴中，準(zhǔn)備染色。
染色方法：將1800ulA液加到200ul檸檬酸緩沖液的細(xì)胞懸液中，將管慢慢倒置，混勻。在室溫下，10分鐘內(nèi)，將管輕輕上下倒置5一6次，然后加入1500uIB液，在室溫下，10分鐘內(nèi)輕輕上下倒置幾次。再加入1500uIC液（原在水浴中），輕輕將管倒置。避光條件下，通過一個30um的尼龍網(wǎng)過濾樣品，然后將樣品置入冰浴中，加入C液染色后，在15分鐘到3小時之間，可進(jìn)行流式光度分析。
這種方法很適用于沒有固定的針吸樣品。非離子去污劑用于溶解細(xì)胞，精胺用于穩(wěn)定未固定的核。精胺的適用濃度是很嚴(yán)格的，濃度如偏低對穩(wěn)定核膜無效，濃度偏高將導(dǎo)致胞核、胞質(zhì)和未溶解細(xì)胞的污染。胰酶能消化細(xì)胞質(zhì)碎片，胰酶仰制劑使胰酶失活，RNA酶可除去RNA的非特異熒光。PI用于DNA熒光染色（參見熒光探針PI染色）。
這種方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：樣品在—80℃存貯并經(jīng)去污劑處理和胰酶消化，細(xì)胞丟失很少，所獲得細(xì)胞核的DNA分布與用同種樣品獲得單個細(xì)胞DNA分布是類似的，細(xì)胞周期各時相百分?jǐn)?shù)也是類似的。DNA分布顯示出很小的細(xì)胞從結(jié)，可獲得很低的CV值。DNA染色是高度定量的，能夠區(qū)分DNA的微小差別（例如人類性染色體）。應(yīng)指出的是：如果原樣品中組織高度壞死或化療引起大量細(xì)胞死亡，核分散處理后將會產(chǎn)生一些自溶的核和很多碎片，來自壞死組織的核比來自活細(xì)胞的核光散射值和熒光強(qiáng)度都高。另外，來自鼠精子的熒光強(qiáng)度比預(yù)料的要低。
總之，使用核懸液的優(yōu)點(diǎn)是容易獲得、DNA分布的質(zhì)量高以及適用于小量的臨床針吸樣品。
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