細(xì)胞周期參數(shù)的測定

點擊次數(shù)：1325　日期：2016/8/1 8:38:18

細(xì)胞周期參數(shù)的測定

測量細(xì)胞周期參數(shù)的傳統(tǒng)方法是脈沖標(biāo)記有絲分裂指數(shù)曲線法，即PLM法。但此法費時間，技術(shù)有絲分裂指數(shù)十分費工且需一定經(jīng)驗，由曲線得到周期參數(shù)通常還要用計算機(jī)擬合，這些都限制了該方法的使用。流式細(xì)胞術(shù)建立后，曾發(fā)展一種利用S時相內(nèi)的窗口，測定每個細(xì)胞放射性的方法，由其曲線可得出群體的Tc和Ts。

假定群體內(nèi)全部細(xì)胞都處在增殖狀態(tài)，即增殖比為1，所有的細(xì)胞動力學(xué)均一，即每個細(xì)胞都以相同的速率通過各個時相。對這樣的群體經(jīng)【3H】-TdR脈沖標(biāo)記30分鐘后，再用DNA特異性染色，流式細(xì)胞計測定DNA直方圖，如圖中的b圖。此圖上S時相中間位置2是個分選窗口，對應(yīng)細(xì)胞周期圖a上S時相相應(yīng)部分也用粗線標(biāo)了出來。將此窗口內(nèi)的細(xì)胞分選出來，測定其RC值。如果在標(biāo)記后不同時間分選，或標(biāo)記后不同時間收貨細(xì)胞，固

定，染色，分別分選然后測定RC值，則可得圖c中的實線，因為【³H】-TdR只是為S期細(xì)胞所摻入，故實線左邊第一個峰寬為1/2Ts，但通常誤差較大因而不用，第二個峰寬為Ts，上述兩峰間的距離是Tco因為分選窗口定在S時相，故此方法稱為RCSi方法。如果分選窗口在G₁時相，如圖b中窗口1，則稱為RCG₁，其相應(yīng)示意圖在c圖上用虛線表示。

由于實際群體動力學(xué)參數(shù)不可避免的離散性，結(jié)果得到的實際曲線不可能是c圖的樣子而是圖d中的圓點（RCS_i）或方點（RCG₁），這是CHO細(xì)胞實測的結(jié)果。為從這樣一組數(shù)據(jù)中提取到動力學(xué)信息，必須用專門的計算機(jī)擬合程序分析，最后得出T_G1、Ts和T_G2M分別為2.4小時，6.5小時和1.6小時。

本方法中的窗口要求在與其他時相不重疊的位置，因而選在圖b中“2”的位置。從原理上說，窗口應(yīng)該窄一些為好，但窗口愈窄分選出足夠細(xì)胞數(shù)量的時間相對長一些，從這個角度看起來，RCG₁方法因G₁期細(xì)胞多而集中，可能較RCS_i為佳，但相應(yīng)的數(shù)據(jù)分析方法略有不同。只是對儀器操作人員要求有較好的素質(zhì)、較多的經(jīng)驗、操作要熟練，否則難以勝任。

原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司

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