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苯丙氨酸解氨酶

點(diǎn)擊次數(shù)：1140　日期：2018/3/12 14:37:12

苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）試劑盒                            分光光度法  50管/48樣
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
PAL（EC4.  3 1  5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的
關(guān)鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關(guān)，
在植物正常生長(zhǎng)發(fā)育和抵御病菌侵害過(guò)程中起重要作用。
測(cè)定原理
PAL催化  L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm處有最大吸收值，
通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率計(jì)算 PAL活性。
所需的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1  mL石英比色皿、研缽、冰
和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：液體 60mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體 40mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×3 瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入 4mL  蒸餾水水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；
試劑三：液體 2.5mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL
提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟
試劑名稱（μL）
測(cè)定管
對(duì)照管
樣本
20
 
試劑一
700
800
試劑二
200
200
混勻，30℃ 準(zhǔn)確水浴  30min
試劑三
40
40
 
混勻，靜置10min后，290nm處記錄測(cè)定管吸光值A(chǔ)1和對(duì)照管吸光值A(chǔ)2，△A=A1-A2。
注意：對(duì)照管只要做一管
PAL活性計(jì)算
（1）按蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個(gè)酶
活性單位。
PAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（Cpr×V樣）÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每mL反應(yīng)體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個(gè)酶活性單位。
PAL（U/g鮮重）＝ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.04mL；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液
體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；

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