LB培養(yǎng)基
配制每升LB(luria-bertani,LB)培養(yǎng)基,應(yīng)在950ml雙蒸水加入;細菌培養(yǎng)用胰化蛋白胨(bacto-tuyptone)10g,細菌培養(yǎng)用酵母提取物(bacto-yeast extract)5g,NaCl 10g。搖動容器直至溶質(zhì)完全溶解,用5mol/L NaOH(約0.2ml)調(diào)節(jié)PH值至7.0,加入雙蒸水至總體積為1L,在13Ibf/in(1.0354x10pa)高壓下蒸汽滅菌20min。 先按上述配制液體培養(yǎng)基,高壓滅菌前加入下列試劑中的1份;細菌培養(yǎng)用瓊脂(Bacto-agar)15g/L(鋪質(zhì)平板),瓊脂糖7g/L(配制頂層瓊脂糖用)。 在15Ibf/in(1.034x10Pa)高壓下蒸汽滅菌20min。從高壓滅菌器中取出培養(yǎng)基時應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)以使溶解的瓊脂或瓊脂糖能均勻分布于整個培養(yǎng)基溶液中。注意,此時培養(yǎng)基溶液可能過熱,炫動液體會發(fā)生暴沸。應(yīng)使培養(yǎng)基降溫至50℃,方可加入不耐熱的物質(zhì)(如抗生素)。為避免產(chǎn)生氣泡,混勻培養(yǎng)基時采用旋動的方式,然后可直接從燒瓶中傾除培養(yǎng)基鋪制平板。90mm制直徑的培養(yǎng)基皿約需30-50ml培養(yǎng)基。如果平板上的培養(yǎng)基有氣泡形成,可在瓊脂或瓊脂糖凝結(jié)前用本生燈灼燒培養(yǎng)基表面以除之。按設(shè)定的顏色記號在相應(yīng)平板的邊緣做標記以區(qū)別不同的培養(yǎng)平板。 培養(yǎng)基完全凝結(jié)后,應(yīng)倒置平皿并貯存于4℃?zhèn)溆。使用?-2h應(yīng)取出貯存在平皿。如果平板是新鮮制備的。在37℃溫育時會發(fā)汗,從而導(dǎo)致細菌可控或噬菌體噬癍在平板表面交互擴散而增加交叉污染的機會。為了避免這一問題,可以拭去平皿內(nèi)部的冷凝水并把平皿倒置于37℃溫育數(shù)小時方宇使用,也可快速甩一下平皿蓋一出去冷凝水已盡可能減少污染的機會,除去蓋上的水滴時應(yīng)把開蓋的平皿倒置握在手上。
保存培養(yǎng)基
細菌可以再穿刺培養(yǎng)物中保存2年之久火災(zāi)甘油的培養(yǎng)物中無限期保存
穿刺培養(yǎng)物
使用容量為2-3ml并帶有螺口旋蓋和橡皮墊圈的剝離小瓶,加入相當于2/3容量的融化LB瓊脂,旋上蓋子,但不擰緊,在15x10Pa高壓蒸汽下滅菌20min。從高壓蒸汽滅菌器中取出剝離試管,冷卻至室溫下寧晉蓋子。房事問保存?zhèn)溆谩?/span> 保存細菌時,用一滅菌的接種針挑取分散良好的單菌落,把針穿過瓊脂直達瓶底數(shù)次,蓋上瓶蓋并與擰緊,在瓶身和瓶蓋上均做好標記,室溫下存放于暗處(普通的做法是將瓶蓋放松,在適當溫度下培養(yǎng)過夜,然后擰緊瓶蓋并加封Parafilm膜,于室溫(做好于4℃)避光保存。
含甘油的培養(yǎng)物
在液體培養(yǎng)基中生長的細菌培養(yǎng)物;取0.85ml細菌培養(yǎng)物,加入0.15ml滅菌甘油(甘油應(yīng)在15x10Pa高壓蒸汽下滅菌20min)振蕩培養(yǎng)物使甘油分布均勻,然后轉(zhuǎn)移到標記號的、帶有螺口和空氣密封圈的保存管內(nèi),在乙醇-干冰或液氮中凍結(jié)后轉(zhuǎn)至-70℃長期保存。 復(fù)蘇菌種時,用滅菌的接種針刮拭凍結(jié)的培養(yǎng)物表面,然后立即把黏附在接種針上的細菌劃于含適當抗生素的LB瓊脂平板表面,凍干保存的菌種管重置于-70℃,而瓊脂平板于37℃培養(yǎng)過夜。
(2)在瓊脂平板上生長的細菌培養(yǎng)無:從瓊脂平板表面刮下細菌放入裝有2mlLB的無菌試管內(nèi),再加入等量的含有30%滅菌甘油的LB培養(yǎng)基,振蕩混合物使甘油完全分解均勻后,分裝于帶有螺口蓋和空氣密封圈的無菌試管中,按上訴方法冰凍保存、
抗生素如下