細(xì)菌不染色標(biāo)本檢查法

懸滴法 泳衣觀察細(xì)菌的形態(tài)及動(dòng)力。

1、區(qū)凹玻片，于凹窩周圍涂抹凡士林少許。

2、在蓋玻片中央放一接種環(huán)細(xì)菌的肉湯培養(yǎng)物（或?qū)⑸僭S固體培養(yǎng)物混懸于一滴生理鹽水中）。

3、將凹玻片翻轉(zhuǎn)，使凹窩對準(zhǔn)蓋玻片中央并蓋于其上，然后翻轉(zhuǎn)玻片，以小鑷子或接種環(huán)柄輕加壓力，使蓋玻片與凹窩周圍黏緊。如無凹玻片時(shí)，也可于載玻片適當(dāng)位置加凡士林，其中墊以其他物體，然后使蓋玻片重疊于玻片之上。

4、將制備好的懸滴標(biāo)本置于顯微鏡載物臺中央，先以低倍鏡找到懸滴的邊緣以后，在換高倍鏡觀察。

5、有鞭毛的細(xì)菌在液體中運(yùn)動(dòng)活潑；無鞭毛的細(xì)菌僅有位置不變的布朗運(yùn)動(dòng)。

   壓滴法（用途同懸滴法）

1、用接種環(huán)取菌液（獲獎(jiǎng)少許固體培養(yǎng)物混懸于一滴生理鹽水中）2-3環(huán)，置于載玻片中央；

2、用內(nèi)資加好蓋玻片，覆蓋于菌液上。在放置時(shí)，先使蓋玻片一邊接觸菌液，緩緩放下，以不產(chǎn)生氣泡為佳。

3、先以低倍鏡找好位置，在意高倍鏡或油鏡觀察。

革蘭染色法

革蘭染色法（Gramstain)是丹麥細(xì)菌學(xué)家革蘭于1884年發(fā)明，可將細(xì)菌鑒別為革蘭陽性菌、革蘭陰性菌兩大類。至今已逾百年，但人在廣泛使用，是細(xì)菌學(xué)中最為經(jīng)典的染色法。

一般認(rèn)為，革蘭染色的原理是由于格蘭陽性菌和陰性菌的細(xì)胞壁機(jī)構(gòu)與化學(xué)組成不同。革蘭陽性菌的細(xì)胞壁較厚，肽聚糖含量多，且交聯(lián)度大，脂類含量少，經(jīng)95%乙醇脫色時(shí)，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物不易被脫掉而保留紫色；革蘭陰性菌的細(xì)胞壁較薄，含有較多的類脂質(zhì)，而肽聚糖的含量較少，乙醇脫色時(shí)溶解外層類脂質(zhì)，致使細(xì)胞壁通透性增高，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物容易被乙醇溶解而脫色，經(jīng)復(fù)染后呈紅色。

制標(biāo)本片

1、圖片：取一接種環(huán)生理鹽水放于載玻片的一段，挑少許變性桿菌或葡萄球菌培養(yǎng)物與鹽水混勻，土城直徑約1cm的圖片，涂片應(yīng)薄而均勻。

2、干燥：圖片放置室溫中，待其自然干燥。

3、固定：標(biāo)本干燥后，手執(zhí)玻片的一段標(biāo)本面向上，通過究竟燈火焰三次，約2-3s（玻片反面觸及皮膚，以不燙為度，以殺死細(xì)菌并使之固定于玻片上），待冷卻后染色。

染色 將治好的標(biāo)本片按下列步驟進(jìn)行染色；

1、滴加結(jié)晶紫染液初染1min，水洗。

2、滴加盧戈氏碘液媒染1min，水洗。

3、滴加95%乙醇脫色，搖動(dòng)玻片0.5-1min，水洗。

4、滴加稀釋付紅染液復(fù)染0.5-1min，水洗，洗水紙吸干后鏡檢。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果；標(biāo)本片滴香柏油一滴，用油鏡觀察，呈紫色的為格蘭陽性菌，呈紅色的為革蘭陰性菌。