免疫鑒定法是利用中藥含有的特異蛋白為抗原制備的特異抗體，與供試品中特異抗原結(jié)合產(chǎn)生沉淀反應(yīng)的一種方法。它是通過制備特異抗原試劑，采用免疫電泳(immuno—electrophoresis)或瓊脂免疫擴散等方法達到鑒定目的的。本方法具有專屬性強的特點，適用于中藥的品質(zhì)鑒別。它涉及的相關(guān)技術(shù)主要有血清學方法、藥理學方法、受體學方法、免疫化學方法、酶聯(lián)免疫法、免疫印跡法等。其中利用中藥含有多糖類、蛋白質(zhì)等具有抗原決定簇的大分子，用它們制成特異性抗體(抗血清)進行中藥鑒定，是一種具有高度選擇性的血清學鑒定方法。血清學鑒定法可用于來源科以上到種以下各分類等級的藥用動植物分類，也可以用于藥用動植物的親緣關(guān)系研究。血清學鑒定特征的研究對中藥復(fù)方制劑的鑒定具有適用性和重要價值。血清學鑒定法中比較重視免疫印跡法(immuno blotting)。該法既可原位轉(zhuǎn)印電泳區(qū)帶，協(xié)助確證中藥特征抗原分布，也可把待鑒別供試品點在硝酸纖維素膜上，直接進行斑點酶聯(lián)免疫吸附測定法(dot—ELISA)鑒別。該方法的缺點是：實驗周期長，所需動物量大，特異性高的抗體不易制備；免疫血清屬于多克隆抗體，存在交叉反應(yīng)，干燥中藥各種蛋白的降解較難解決。電泳(elctrophoresis，EP)是一種分離和鑒定混合物中帶電離子的技術(shù)，其原理是利用中藥含有蛋白質(zhì)帶電荷的成分，在同一電場作用下，由于各組分所帶電荷的性質(zhì)、電荷數(shù)目以及分子質(zhì)量不同，而泳動方向和速度不同，在一定時間內(nèi)，各成分的泳動率不同，結(jié)合譜帶數(shù)和染色不同達到鑒定的目的。本方法用于含有蛋白質(zhì)、多肽和酶類等中藥的鑒定，其特點是快速、準確、專屬性強、靈敏度高、重現(xiàn)性好。鑒定對象多數(shù)為動物藥類，植物藥的果實和種子類、部分根及根莖類中藥，以及含有上述成分的中成藥。常用的方法有SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電點聚焦凝膠電泳、不連續(xù)性聚丙烯酰胺凝膠電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、區(qū)帶毛細管電泳、膠束毛細管電泳等。其中聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)具有機械性能好、與被分離物質(zhì)不起反應(yīng)、對pH值和溫度變化較穩(wěn)定、重復(fù)性好、靈敏度高等優(yōu)點。聚丙烯酰胺凝膠電泳是由丙烯酰胺和N，N一亞甲基雙丙烯酰胺在催化劑作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)但其缺點是標記不能用3HzO，而需用3Hz，因此要在真空條件下標記，需要一定的條件和設(shè)備。而131I的半衰期較短，因此，在放射免疫分析時，常用125I來標記抗原。以下僅以125I標記抗原進行說明。放射性碘化標記技術(shù)可分為兩類：一類是肽、蛋白質(zhì)和酶類，可以直接進行碘化標記，即直接將125I連接到被標記分子的酪氨酸殘基上的羥苯基上；另一類是甾體類化合物、環(huán)核苷酸、前列腺素等小分子化合物，因缺乏可供碘標記的部分，多用間接碘化標記法，即把碘標記后的配位體連接到被標記抗原的氨基、羧基和羥苯基上。固相系指預(yù)先將抗體與固體顆�；蚬腆w表面結(jié)合，形成不溶解但仍保持抗體的特異性結(jié)合能力。當被測物、標記物的溶劑加至固相抗體中，經(jīng)反應(yīng)后，液相中的標記物被結(jié)合到固相支持物上，洗去未結(jié)合的標記物，即可將B相和F卡H分離。固相法簡便、快速，從而已經(jīng)發(fā)展成為了一種固相放射免疫分析方法。反應(yīng)液一每管加入羊抗兔IgG羧化聚苯乙烯乳膠結(jié)合的免疫微球lmL(加前振搖)一37℃水浴15min，離心20min(4000r／min)一立即去除上清液(F相)，測定沉淀物(B相)5．微孑L薄膜分離微孔薄膜是一種具有一定孑L徑的特殊過濾膜，直徑0。25mm，微孔直徑≤\0．45肛m，一般多采用孔徑為0．25肛m的。將反應(yīng)后的溶液放入裝有微孔薄濾器上，經(jīng)抽濾后，標記物如系小分子化合物，則被濾出，而大分子的復(fù)合物被吸附在微孔薄膜的表面。從而將F相和B相分離。