土壤脫氫酶 Soil dehydrogenase, sDHA 試劑盒說(shuō)明書
(分光光度法 50T/24S)
測(cè)定意義
土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物 以及其對(duì)有機(jī)物的降解活性，可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)
測(cè)定原理
氫 體 2, 3, 5 - 化 苯 四 唑 2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC 在細(xì)胞呼吸
過(guò)程中接 氫以后，被還原為 苯 甲鐟 Triphenyl Formazone, TF ，TF 呈現(xiàn)紅色，在波長(zhǎng) 485nm 處有最大吸收峰，采用分光光度法于 485nm 測(cè)定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性
自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品
篩子 天恒溫 養(yǎng)箱或水浴鍋溫離心機(jī) 可見分光光度玻璃比色皿，冰 蒸餾
水 丙酮允許快遞，請(qǐng)用戶自備
試劑的組成和配制
試劑一：粉劑×1 瓶，使用前加 30mL 水溶解，4℃避光保存 盡 現(xiàn)配現(xiàn)用試劑 ：液體 50mL×1 瓶，4℃保存試劑 ：丙酮，自備
樣品處理
1、土壤樣品：準(zhǔn)確稱取過(guò)40目篩的新鮮土壤樣品約0.1g（以保證TTC與土壤顆粒充分接觸）。
2、污泥樣品：污泥用蒸餾水洗滌，12000rpm，25℃，離心10min，棄上清，反復(fù)3-4次。
測(cè)定步驟和操作表
對(duì)照管 測(cè)定管
樣品（g） 0.1 0.1
試劑一（mL） 0.5
試劑二（mL） 1 0.5
充分混勻，37℃，暗培養(yǎng)6h，取出后立即水浴5min
試劑三（mL） 0.5 0.5
反復(fù)振蕩數(shù)次，37℃保溫10min，12000rpm，4℃，離心5min，取上清1mL于1mL玻璃比色皿，對(duì)照管調(diào)零，測(cè)定A485.
脫氫酶活力計(jì)算
酶活單位定義：在37℃時(shí)，每克樣品每小時(shí)使反應(yīng)體系OD值每增加0.01為一個(gè)酶活單位。
計(jì)算公式：SDHA活性（U/g）=A485/0.01÷培養(yǎng)時(shí)間（h）÷樣品質(zhì)量（g）=16.67×A485÷樣品質(zhì)量（g）
注意事項(xiàng)
1. 配制好的試劑一避光保存于 4℃，最好在一周內(nèi)使用，若出現(xiàn)紅色，則 能使用
2. 試劑 易揮發(fā)，有毒，為了您的健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，戴口罩，戴乳膠手套操作
3. 反應(yīng)完成后立即冰浴以終止反應(yīng)，并去除 凈殘留的反應(yīng)液
4. 如果測(cè)定出來(lái)的吸光值較大， 少樣品用 再進(jìn)行測(cè)定
5. 試劑盒 2-8℃保存
技術(shù)支持: